Синтез и биологические свойства производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных

ч. 1



На правах рукописи

Губаева Регина Амуровна


СИНТЕЗ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНЫХ

(1-н-ПРОПИЛКСАНТИНИЛ-8-ТИО)УКСУСНЫХ КИСЛОТ,

Содержащих тиетановый цикл

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Самара - 2011

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

профессор Халиуллин Феркат Адельзянович
Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор Шаталаев Иван Федорович
доктор химических наук,

профессор Буланова Анджела Владимировна


Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации


Защита диссертации состоится «2» марта 2012г. в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России по адресу г. Самара, проспект К. Маркса, 165 Б.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171).
Автореферат разослан «___»____________2012 г.
Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук,

доцент И.К. Петрухина



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Производные ксантина – один из наиболее перспективных классов биологически активных соединений с широким спектром действия. Среди них обнаружены соединения, проявляющие спазмолитическую, антиагрегационную, бронхорасширяющую, противоопухолевую, гипогликемическую и другие виды активности. В настоящее время в медицине применяются такие лекарственные препараты, как кофеин, теобромин, теофиллин, аминофиллин, пентоксифиллин, дипрофиллин, ксантинола никотинат. Интенсивный поиск биологически активных веществ в ряду производных ксантина продолжается.

На кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета разработан общий способ синтеза нового ряда производных ксантина – 1,8-дизамещенных ксантинов, содержащих в положении 7 четырехчленный тиетановый цикл. На основе 3-метил- и 1,3-диметилксантинов, содержащих тиетановый цикл, синтезированы соединения с иммунотропной, бронхолитической, спазмолитической, гепатотропной активностью. Известны незамещенные по N-1 положению ксантина гидразиды и соли тиетансодержащих (3-метилксантинил-8-тио)уксусных кислот, проявляющие высокую гемореологическую активность. Незамещенная N-Н группа в положении 1 у 3-метил-7-(тиетанил-3)ксантинов позволяет синтезировать перспективные в биологическом отношении N-1-замещенные 7-(тиетанил-3)ксантины. В связи с вышеизложенным, поиск биологически активных производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, является актуальным.

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Башкирского государственного медицинского университета по проблеме “Изыскание и изучение новых лекарственных средств” (государственная регистрация № 01200707996).

Цель исследования. Разработка методов синтеза и поиск новых биологически активных соединений в ряду производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

Задачи исследования.


  1. Исследование реакций 8-бром-3-метил-1-н-пропилксантинов, содержащих в положении 7 тиетановый цикл с различной степенью окисления атома серы, с тиогликолевой кислотой. Разработка методов синтеза [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот и их солей.

  2. Разработка методов синтеза эфиров, гидразидов, илиденгидразидов [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот.

  3. Исследование физико-химических свойств, установление структуры и спектральных характеристик новых рядов производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

  4. Анализ результатов биологических испытаний и выявление некоторых закономерностей зависимости «структура – активность» в ряду производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

Научная новизна. Впервые исследованы реакции 8-бром-3-метил-1-н-пропилксантинов, содержащих в положении 7 тиетановый цикл с различной степенью окисления атома серы, с тиогликолевой кислотой. Получены новые [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусные кислоты и ряд их солей. Синтезированы эфиры и гидразиды [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот. Разработаны методы синтеза илиденгидразидов (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

С помощью метода ЯМР 1Н - спектроскопии исследована Z, E-изомерия синтезированных гидразидов и илиденгидразидов. Установлено, что гидразиды и илиденгидразиды (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, существуют в виде двух изомеров за счет заторможенного вращения вокруг гидразидной С-N связи.



Практическая значимость. Разработаны методы синтеза новых рядов производных [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных. Среди полученных производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, выявлены соединения проявляющие антиагрегационную, проагрегантную, антикоагуляционную и антидепрессивную активность. Выявлены вещества, перспективные для дальнейшего углубленного изучения: циклогексиламмониевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты, проявляющая антиагрегационную и антикоагуляционную активность, бензиламмониевая и циклогексиламмониевая соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты, обладающие проагрегантной активностью, морфолиниевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты, проявляющая антидепрессивную активность.

Разработанные методы синтеза и результаты биологических испытаний новых производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, могут использоваться для дальнейшего направленного синтеза биологически активных соединений. Разработан лабораторный регламент на производство исходного 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантина.



Внедрение в практику. Препаративные способы синтеза и результаты биологических испытаний новых производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, используются при проведении научных исследований и в учебном процессе на кафедрах фармакологии № 1, фармацевтической химии, биологической химии Башкирского государственного медицинского университета.

Апробация. Материалы диссертации обсуждены на 5-й юбилейной Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука – 2006» (Уфа, 2006 г.), Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан с международным участием «Медицинская наука – 2009» (Уфа, 2009 г.), 74-й, 75-й, 76-й Республиканской итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2009, 2010, 2011 г.), научной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2010 г.), VIII Всероссийской конференции с международным участием «Химия и медицина» (Уфа, 2010 г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Новые материалы, химические технологии и реагенты для промышленности, медицины и сельского хозяйства на основе нефтехимического и возобновляемого сырья» (Уфа, 2010 г.), Всероссийской научно-практической конференции «Современная фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты» (Самара, 2011 г.), XIV молодежной конференции по органической химии (Екатеринбург, 2011 г.).

Публикации. Основное содержание диссертации изложено в 16 печатных работах (в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК).

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработанные методы синтеза [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксоти-етанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот.

2. Разработанные методы синтеза солей и эфиров (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

3. Разработанные методы синтеза гидразидов и илиденгидразидов (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

4. Структуры впервые синтезированных соединений, установленные на основе спектральных исследований.

5. Результаты анализа биологической активности синтезированных соединений и установление закономерности «структура – активность» в ряду производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.



Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 163 стр., состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Содержит 25 таблиц, 17 рисунков. Список литературы включает 155 источников.
СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Синтез и биологическая активность замещенных ксантинов

(литературный обзор)

В обзоре систематизированы литературные сведения о замещенных ксантинах, полученных реакциями по 1, 3, 7 и 8 положениям ксантинового бицикла, а также об их биологической активности.




  1. Синтез производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот

(обсуждение результатов собственных исследований)

Известны незамещенные по N-1- положению соли и гидразиды (ксантинил-8-тио)уксусных кислот, проявляющие высокую гемореологическую активность. Производные ксантина, содержащие тиетановый цикл, проявляют также иммунотропную, бронхолитическую, гепатотропную и другие виды активности. Поэтому синтез производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл с различной степенью окисления атома серы, представляет большой интерес с точки зрения поиска биологически активных веществ.


2.1. Синтез исходных соединений

В качестве исходных соединений использованы 3-метилксантин и эпихлоргидрин, выпускаемые промышленностью, а также 8-бром-3-метилксантин (1), эпитиохлоргидрин (2), 8-бром-3-метил-7-(тиетанил-3)ксантин (3), калиевая соль 8-бром-3-метил-7-(тиетанил-3)ксантина (4), 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(ти-етанил-3)ксантин (5), 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантин (6), 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантин (7), синтезированные по известным методикам с константами, соответствующими литературным данным.


2.2. Синтез производных [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты

Установлено, что при взаимодействии 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантина (5) с тиогликолевой кислотой в этаноле в присутствии калия гидроксида идет нуклеофильное замещение атома брома с образованием [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (8) с выходом 50 % (схема 1).

Схема 1

ЯМР 1Н спектр кислоты (8) содержит характерные сигналы протонов тиетанового цикла в интервалах 3.24 – 3.37, 4.29 – 4.38 и 5.84 – 5.96 м.д., соответствующие двум S(CH)2 группам и NCH группе. В спектре наблюдаются также сигналы протонов 1-н-пропильного фрагмента и синглет 3–СН3 группы. Синглет при 4.06 м.д., перекрывающийся с сигналом 1-СН2 группы, подтверждает наличие фрагмента тиогликолевой кислоты.

Строение кислоты (8) подтверждено также ИК спектром.

Соли 2-[3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (9-16) получали добавлением к раствору кислоты (8) в ацетоне соответствующего основания. Гидроксиды натрия и калия добавляли в виде водных растворов. Соединения (9-16) образуются с выходом 45-93 % (схема 2).

Схема 2

ЯМР 1Н спектры солей (12, 13) содержат сигналы протонов тиетанового цикла и 1-н-пропильного фрагмента, синглеты 3-СН3 и SCH2 групп. Образование солей подтверждается сигналами соответствующих протонированных аминов. Например, в спектре соли (13) наблюдаются триплет и квартет с центрами при 1.32 и 2.95 м.д. с КССВ 7.2 Гц, подтверждающие образование диэтиламмониевой соли.

Строение солей (9, 11-16) подтверждено также ИК спектрами.

Кипячением кислоты (8) в среде этанола в присутствии концентрированной серной кислоты, как катализирующего и водоотнимающего агента, синтезировали этиловый эфир [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]ук­сусной кислоты (17) с выходом 72 % (схема 3).

Схема 3

Спектр ЯМР 1Н этилового эфира (17) содержит сигналы протонов тиетанового цикла, 1-н-пропильного фрагмента, синглеты 3-СН3 и SCH2 групп. Наличие сложно-эфирной группы подтверждается триплетом CH3 группы при 1.23 м.д. и квартетом ОCH2 группы при 4.17 м.д..

ЯМР 13С спектр сложного эфира (17) содержит сигналы углеродов бицикла ксантина, 1-н-пропильного остатка, SCH2 и 3-СН3 групп. Сигналы углеродов тиетанового цикла регистрируются при 34.98 (S(CH)2) и 51.79 (NСН) м.д.. Образование сложного эфира подтверждается сигналами углеродов этокси-группы при 14.09 и 62.09 м.д..

Строение соединения (17) подтверждено также ИК спектром.

Реакцией сложного эфира (17) с трехкратным мольным избытком гидразин-гидрата в среде этанола в течение 1 часа получили гидразид [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (18) с выходом 89 % (схема 3).

В ЯМР 1Н спектре гидразида (18) наблюдаются сигналы протонов тиетанового цикла, 3-СН3 группы и 1-н-пропильного фрагмента. Сигналы протонов NH и NН2 групп остатка гидразида и SCH2 группы удвоены и регистрируются в виде двух синглетов разной интенсивности, что показывает существование Z, Е-изомерии вокруг гидразидной С–N связи. Соотношение изомеров, вычисленное как отношение высот синглетов SСН2 группы при 3.95 (Z) и 4.36 (Е) м.д., составляет 7:1.



Е-изомер Z-изомер

R = 3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио

Строение соединения (18) подтверждено также ИК спектром.

Взаимодействием гидразида (18) с ароматическими карбонильными соединениями являются проведение реакции при кипячении в среде этанола при мольном соотношении реагентов 1:1,2 в присутствии каталитических количеств хлористоводородной кислоты в течение 30 минут синтезировали илиденгидразиды 2-[3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (19-25) с выходом 52-79 % (схема 4).

С
хема 4

В ЯМР 1Н спектрах соединений (20, 21, 24) наблюдаются сигналы протонов 1-н-пропильного заместителя, 3-СН3 группы и тиетанового цикла, а также заместителей в положении 8. В спектрах проявляется Z, Е-изомерия вокруг гидразидной С–N связи, что подтверждается удвоением синглетов SCH2, NH и =СН групп и сигналов ароматического заместителя. Например в спектре соединения (20) соотношение изомеров, вычисленное как соотношение высот синглетов SCH2 группы при 4.44 (Е) и 4.10 (Z) м.д., составляет 2:1.

Строение илиденгидразидов (19-25) подтверждено также ИК спектрами.


2.3. Синтез производных [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты

[3-Метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусную кислоту (26) получали взаимодействием 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксоотиетанил-3)ксантина (6) и тиогликолевой кислоты в соотношении 1:2 в среде этанола в присутствии трехкратного мольного избытка гидроксида калия. Кислота (26) образуется с выходом 73 % (схема 5).

Схема 5

ЯМР 1Н спектр кислоты (26) содержит характерные сигналы протонов тиетаноксидного цикла в интервалах 3.42 – 3.50, 4.09 – 4.17 и 6.25 – 6.36 м.д., соответствующие двум S(CH)2 группам и NCH группе. В спектре наблюдаются также сигналы протонов 1-н-пропильного фрагмента и синглет 3–СН3 группы. Синглет интенсивностью 2Н при 4.06 м.д. подтверждает наличие фрагмента тиогликолевой кислоты.

Строение кислоты (26) подтверждено также ИК спектром.

Реакцией кислоты (26) со щелочами и аминами в среде ацетона синтезировали не описанные ранее соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (27-33). Соединения (27-33) образуются с выходом 23-84 % (схема 6).

Схема 6

ЯМР 1Н спектры солей (29, 32) содержат сигналы протонов тиетаноксидного цикла, 1-н-пропильного фрагмента, синглет 3-СН3 группы, а также сигналы протонированных аминов. В ЯМР 1Н спектре соли (29) сигналы протонированного бензиламина наблюдаются в виде синглета NCH2-группы при 3.76 м.д. и мультиплета С6Н5-группы в интервале 7.27–7.42 м.д..

Строение солей (27, 29-32) подтверждено также ИК спектрами.

Этиловый эфир [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (34) получали при кипячении кислоты (26) в среде этанола в течение трех часов в присутствии концентрированной серной кислоты с выходом 48 % (схема 7)


Схема 7

В ИК спектре соединения (34) отсутствуют полосы поглощения валентных колебаний О-Н связи, наблюдается полоса поглощения S=O группы при 1033 см-1, что подтверждает образование сложного эфира и сохранение тиетаноксидного цикла.

Взаимодействием соединения (34) с гидразин-гидратом в мольном соотношении 1:3 в среде этанола синтезировали гидразид [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (35) с выходом 60 % (схема 7).

В ЯМР 1Н спектре гидразида (35) наблюдаются сигналы протонов тиетаноксидного цикла, 1-н-пропильного фрагмента, синглеты NСН3 и SCH2 групп. Сигналы протонов остатка гидразина регистрируются в виде уширенного синглета NН2 группы интенсивностью 2Н при 4.11 и синглета NН группы интенсивностью 1Н при 8.30 м.д..

Строение соединения (35) подтверждено также ИК спектром.

Взаимодействием соединения (35) с ароматическими альдегидами и ацетофенонами в среде этанола с добавлением каталитических количеств хлористоводородной кислоты получали илиденгидразиды [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (36-42) (схема 8). Илиденгидразиды (36-42) образуются с выходом 52-84 %.

Схема 8

В ЯМР 1Н спектрах соединений (37, 38, 41) наблюдаются сигналы протонов 1-н-пропильного заместителя, 3-СН3 группы и тиетаноксидного цикла, а также заместителей в положении 8. В спектрах проявляется Z, Е-изомерия вокруг гидразидной С-N связи, что подтверждается удвоением синглетов SСН2, NH и =СН групп, а также удвоением сигналов ароматического заместителя. В спектре соединения (37) преобладающим является Е-изомер, соотношение изомеров составляет 2:1. Синглеты SCH2 группы регистрируются при 4.39 (Е) и 4.07 (Z) м.д..

Строение илиденгидразидов (36-39, 41, 42) подтверждено также ИК спектрами.
2.4. Синтез производных [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3) ксантинил-8-тио]уксусной кислоты

Реакцию 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксоотиетанил-3)ксантина (7) с тиогликолевой кислотой проводили в мольном соотношении 1:2 в водной среде в присутствии трехкратного мольного избытка гидроксида калия. [3-Метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусная кислота (43) образуется с выходом 73 % (схема 9).

Схема 9

ЯМР 1Н спектр кислоты (43) содержит характерные сигналы протонов тиетандиоксидного цикла в интервалах 4.50 – 4.58, 4.99 – 5.07 и 5.42 – 5.52 м.д., соответствующие двум S(CH)2 группам и NCH. В спектре наблюдаются также сигналы протонов 1-н-пропильного фрагмента и синглет 3–СН3 группы. Синглет интенсивностью 2Н при 4.09 м.д. подтверждает наличие фрагмента тиогликолевой кислоты.

Строение кислоты (43) подтверждено также ИК спектром.

Взаимодействием кислоты (43) со щелочами и аминами в среде ацетона получили не описанные ранее соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (44-50). Выход солей (44-50) составил 40-93 % (схема 10).

Схема 10

ЯМР 1Н спектры солей (46, 48) содержат сигналы протонов 1-н-пропильного фрагмента, тиетандиоксидного цикла и синглет 3-СН3 группы. Спектры содержат также сигналы протонов соответствующих протонированных аминов. Например, сигналы протонированного бензиламина наблюдаются в виде синглета NCH2 группы при 3.97 м.д. и мультиплета С6Н5 группы в интервале 7.34–7.41 м.д..

Строение солей (46-49) подтверждено также ИК спектрами.

Этиловый эфир [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (51) синтезировали кипячением кислоты (43) в среде этанола в течение трех часов в присутствии концентрированной серной кислоты в качестве катализирующего и водоотнимающего агента (схема 11). Эфир (51) образуется с выходом 87 %.

Схема 11

Спектр ЯМР 1Н этилового эфира (51) содержит сигналы протонов тиетандиоксилного цикла, 1-н-пропильного фрагмента, синглеты 3-СН3 и SCH2 групп. Триплет при 1.19 м.д. и квартет при 4.11 м.д. с КССВ 7.05 Гц подтверждают образование сложного эфира.

ЯМР 13С спектр сложного эфира (51) содержит сигналы углеродов бицикла ксантина, 1-н-пропильного остатка, SCH2 и 3-СН3 групп. Сигналы углеродов тиетандиоксидного цикла регистрируются при 70.01 (S(CH)2) и 39.16 (NСH) м.д.. Образование сложного эфира подтверждается сигналами углеродов этокси-группы при 13.97 и 61.38 м.д..

Строение соединения (51) подтверждено также ИК спектром.

Кипячением этилового эфира (51) с гидразин-гидратом в соотношении 1:3 в среде этанола в течение 30 минут синтезировали гидразид [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (52) с выходом 71 % (схема 11).

В ЯМР 1Н спектре гидразида (52) наблюдаются сигналы протонов тиетандиоксидного цикла, 1-н-пропильного фрагмента и синглет 3-СН3 группы. Удвоение синглетов SCH2, NH и NН2 групп показывает существование Z, Е-изомерии вокруг гидразидной С-N связи. Соотношение изомеров, вычисленное как отношение высот синглетов SCH2 группы при 3.91 (Z) и 4.32 (Е) м.д., составляет 5:1.

Строение соединения (52) подтверждено также ИК спектром.

Илиденгидразиды [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (53-58) получали взаимодействием соединения (52) с ароматическими альдегидами и ацетофенонами (схема 12) в среде этанола с добавлением каталитических количеств хлористоводородной кислоты. Илиденпроизводные (53-58) образуются с выходом 54-90 %.

Схема 12

В ЯМР 1Н спектрах соединений (53, 54, 57) наблюдаются сигналы протонов 1-н-пропильного заместителя, 3-СН3 группы и тиетандиоксидного цикла, а также заместителей в положении 8. В спектрах проявляется Z, Е-изомерия вокруг гидразидной С–N связи, что подтверждается удвоением синглетов SCH2, NH и =СН групп и сигналов ароматического заместителя. В спектре соединения (53) соотношение изомеров, вычисленное как отношение высот синглетов SCH2 группы 4.10 (Z) и 4.43 (Е) м.д., составляет 1:2.

Строение илиденгидразидов (53-55, 57) подтверждено также ИК спектрами.
3. Анализ результатов биологических испытаний производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот

С целью выявления биологической активности синтезированные соединения испытаны на антиагрегационную, антикоагуляционную и антидепрессивную активность на кафедрах биохимии и фармакологии №1 Башкирского государственного медицинского университета. Проведен прогноз их биологической активности.

Влияние на агрегацию тромбоцитов 14 новых производных (1-н-про-пилксантинил-8-тио)уксусных кислот (8, 14-16, 26, 27-32, 43, 46-48) определяли по методу Born на агрегометре “Thromlite-1006A” с использованием донорской крови человека. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов (АДФ, коллаген). Препараты сравнения – пентоксифиллин и этамзилат.

При использовании в качестве индуктора АДФ наибольшую антиагрегационную активность в концентрации 2 ммоль/л проявляют соли (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих неокисленный тиетановый цикл (15) и тиетаноксидный цикл (31). Бензиламмониевая и циклогексиаммониевая соли (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусной кислоты, содержащей диоксотиетановый цикл (46, 48) проявили проагрегантную активность (табл. 1), превосходящую этамзилат более двух раз, не вызывая в отличие от этамзилата спонтанную агрегацию.

При использовании в качестве индуктора коллагена наибольшую антиагрегационную активность проявила циклогексиламмониевая соль (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусной кислоты, содержащей оксотиетановый цикл (32), подавляя агрегацию тромбоцитов в концентрации 2 ммоль/л на 12.3 %. Пентоксифиллин в данной концентрации не влияет на коллаген-индуцированную агрегацию тромбоцитов.

Таблица 1



Влияние соединений 46,48 и этамзилата на АДФ-индуцированную

агрегацию тромбоцитов

Соедине-

ние


Концентрация, ммоль/л

n

Спонтанная агрегация, % к контролю

Усиление агрегации тромбоцитов, % к контролю

46

2

7

-

8,5±2,1*, **

1

7

-

5,1±1,9*

0,5

7

-

2,3±1,2*

48

2

7

-

9,9±2,3*, **

1

7

-

7,2±1,7*, **

0,5

7

-

3,1±1,4*

этамзилат

2

7

22,1±3,4*

3,7±1,2*

1

7

10,2±2,9*

4,2±1,4*

0,5

7

2,9±1,5*

-

Примечание: * - р<0,05;

** - отличие от препарата сравнения достоверно (р=0,005).


Антикоагуляционную активность 14 производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот (8, 14-16, 26, 27-32, 43, 46-48) определяли на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 с использованием донорской крови человека. Препарат сравнения – гепарин. Установлено, что некоторые исследуемые вещества и гепарин в концентрации 1 мг/мл увеличивают активированное частичное тромбопластиновое время. Активность соединений уменьшается в следующем порядке: производные тиетаноксида, производные тиетандиоксида, производные тиетана. Соли с первичными аминами (32, 48) активнее солей со вторичными аминами (30, 47) в своих рядах. Циклогексиламмониевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (32) проявляет антикоагуляционную активность (76.2 %), превосходящую препарат сравнения гепарин (54.7 %).

Антидепрессивную активность 12 производных (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот (8, 14, 17, 18, 26, 28, 34, 35, 43, 45, 51, 52) в дозе 2 мг/кг определяли на половозрелых неинбредных мышах-самцах в тестах принудительного плавания и подвешивания за хвост. Препарат сравнения - флуоксетин. Антидепрессивную активность по разным показателям проявляют кислота (8), содержащая неокисленный тиетановый цикл, ее морфолиниевая соль (14) и гидразид (18), а также сложный эфир (34), содержащий тиетаноксидный цикл, кислота (43), содержащая тиетандиоксидный цикл и ее гидразид (52). По длительности иммобилизации в обоих тестах наиболее активны соединения, содержащие неокисленный тиетановый цикл. Наибольшую антидепрессивную активность проявила морфолиниевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (14), вызывающая уменьшение длительности иммобилизации в тесте подвешивания за хвост на 55 %, в тесте принудительного плавания на 48 % и уменьшение индекса депрессивности на 13 %.

Прогноз биологической активности синтезированных соединений проводился по структурной формуле в интернет-версии кoмпьютерной cистемы PASS (Prediction of Activity Spectra for Substances). Установлена высокая вероятность Pa > 0.7 обнаружения среди синтезированных производных (1-н-про­пилксантинил-8-тио)уксусных кислот иммуномодуляторов и модуляторов цитокинов. Для них прогнозируются также диуретическая, антиастматическая, противомикробная, противотуберкулезная и другие виды активности.


ВЫВОДЫ:
1. Установлено, что при взаимодействии 8-бром-3-метил-1-н-пропил-ксантинов, содержащих в положении 7 тиетановый цикл, с тиогликолевой кислотой происходит нуклеофильное замещение атома брома на остаток тиогликолевой кислоты, а тиетановый цикл сохраняется. Разработаны методы синтеза (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл.

2. Разработаны методы синтеза солей [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксо-тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот реакциями соответствующих кислот с гидроксидами щелочных металлов и аминами.

3. Разработаны методы синтеза эфиров (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих в положении 7 тиетановый цикл с различной степенью окисления атома серы, реакциями [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот с этиловым спиртом в присутствии концентрированной серной кислоты.

4. Разработаны методы синтеза гидразидов (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих в положении 7 тиетановый цикл с различной степенью окисления атома серы, реакциями этиловых эфиров [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот с гидразин-гидратом.

5. Разработаны методы синтеза илиденгидразидов (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих в положении 7 тиетановый цикл с различной степенью окисления атома серы, взаимодействием гидразидов [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот с ароматическими альдегидами и кетонами.

6. Данными ЯМР 1Н спектроскопии доказано, что гидразиды и илиденгидразиды [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксоти-етанил-3)-, [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]ук-сусных кислот существуют в виде Z- и Е- изомеров относительно гидразидной связи С-N.

7. Выявлены новые производные (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот проявляющие антиагрегационную, проагрегантную, антикоагуляционную и антидепрессивную активность. Установлены некоторые закономерности зависимости структура – активность в ряду солей (1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл. Проведен прогноз биологической активности синтезированных соединений в компьютерной системе PASS, который показал высокую вероятность обнаружения среди них иммуномодуляторов и модуляторов цитокинов.

8. Для дальнейшего углубленного изучения рекомендованы: циклогексиламмониевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты, проявляющая антиагрегационную и антикоагуляционную активность бензиламмониевая и циклогексиламмониевая соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты, проявляющие прагрегантную активность и морфолиниевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты, проявляющая антидепрессивную активность.


Основное содержание диссертации опубликовано в работах.

1. Халиуллин, Ф.А. Синтез тиетансодержащих (3-метил-1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот / Ф.А. Халиуллин, Р.А. Губаева, Ю.В. Шабалина // Башкирский химический журнал.- 2009.- Т. 16, № 4. - С. 93-94.

2. Поиск активных соединений в ряду производных ксантина, влияющих на сосудисто-тромбацетарное звено гемостаза / Ф.Х. Камилов, Г.А. Тимирханова, А.В. Самородов , Ф.А. Халиуллин, Р.А. Губаева // Вестник Российского университета дружбы народов. - 2011. - № 1. - С. 66-69.

3. Губаева, Р.А. Синтез илиденгидразидов [3-метил-1-н-пропил-7-(тиета­нил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты / Р.А. Губаева, Ю.В. Шабалина, Ф.А. Халиуллин // Башкирский химический журнал.- 2011. - Т. 18, № 1. - С. 109-110.

4. Реакции замещения производных 8-бром-3-метилксантина, содержащих тиетановый цикл / Ф.А. Халиуллин, Ю.В. Филипенко, А.З. Саитгаллина, Р.А. Губаева // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. - Вып.59. - Пятигорск, 2004. - С. 227-229

5. Филипенко, Ю.В. Реакции 8-бром-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинов с нуклеофильными реагентами / Ю.В. Филипенко, Ф.А. Халиуллин, Р.А. Губаева // Материалы 5-й юбилейной Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2006», - Уфа, 2006.- С. 168-169.

6. Губаева, Р.А. Синтез солей 3-метил-1-пропил-7-(тиетанил-3)-ксантинил-8-тиоуксусной кислоты / Р.А. Губаева, Ф.А. Халиуллин // Материалы Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука-2009». -Уфа, 2009.- С. 126-127.

7. Самородов, А.В. Результаты первичных исследований влияния производных ксантина на функциональную активность тромбоцитов/ А.В. Самородов, Р.А. Губаева, А.З Саитгалина// Вопросы теоретической и практической медицины. Материалы 74-й Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых.- Уфа, 2009. - Т.2. - С. 124-126.

8. Синтез и биологическая активность солей 1-замещенных (3-метил­ксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл / Ф.А. Халиуллин, Р.А. Губаева, Ю.В. Шабалина// Химия и медицина: тезисы докладов VIII Всероссийской конференции с международным участием.- Уфа, 2010.- С. 79.

9. Губаева, Р.А. Синтез 3-метил-1-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тиоуксусной кислоты и ее солей / Р.А. Губаева, Ф.А. Халиуллин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. - вып.65.- Пятигорск, 2010. - С.305-306.

10. Синтез биологически активных солей [1-алкил-3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусных кислот / Р.А. Губаева, Д.З. Муратаев, Ю.В. Шабалина, Ф.А. Халиуллин // Новые материалы, химические технологии и реагенты для промышленности, медицины и сельского хозяйства на основе нефтехимического и возобновляемого сырья: материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Уфа, 2010. - С. 82-83.

11. Губаева, Р.А. Синтез некоторых производных 8-бром-3-метил-1-н-пропил-7-(тиетанил-3)ксантина / Р.А. Губаева, Д.А. Мунасипова // Вопросы теоретической и практической медицины. Материалы 75-й Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых.- Уфа, 2010. - Т.1. - С. 154-155.

12. Губаева, Р.А 8-Замещенные 1-алкил-3-метилксантины, содержащие тиетановый цикл / Р.А. Губаева, Д.З. Муратаев, Р.М. Шарафутдинов //Вопросы теоретической и практической медицины. Материалы 76-й Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых. – Уфа, 2011. - Т.1. - С. 146-147.

13. Синтезы и реакции тиетанилксантинов / Ю.В. Шабалина, Р.М. Шарафутдинов, Р.А. Губаева, Д.З. Муратаев, Ф.А. Халиуллин //Материалы XIV молодежной конференции по органической химии - Екатеринбург, 2011. - С. 518-521.

14. Синтез и биологическая активность 8-замещенных 1-алкил-3-метилксантинов, содержащих тиетановый цикл / Ю.В. Шабалина, Р.А. Губаева , Р.М. Шарафутдинов, Д.З. Муратаев, Ф.А. Халиуллин //Всероссийская научно-практическая конференция «Современная фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты»: сборник материалов.- Самара, 2011.- С. 85-87.

15. Синтез и свойства 8-замещенных 1-алкил-3-метил-7-(тиетанил-3)ксантинов /Ю.В. Шабалина, Р.А. Губаева, А.З. Ахмерова, Р.М. Шарафутдинов, Д.З. Муратаев //Материалы конференции «Современные аспекты медицины и фармации-2011». - Вып.XXIV, дополнение 2. - Запорожье, 2011. – С. 186.

Губаева Регина Амуровна

СИНТЕЗ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНЫХ

(1-н-ПРОПИЛКСАНТИНИЛ-8-ТИО)УКСУСНЫХ КИСЛОТ
14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия
Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук
Подписано к печати « » г.

Формат 60x84/16. Бумага офсетная




ч. 1